Andrew Lees博士于2006年創(chuàng)建了Fina Bio公司，以幫助新興市場疫苗制造商學會為疫苗生產價格合理的蛋白質多糖偶聯物。Fina Bio公司現在是生物技術和疫苗行業(yè)聯合疫苗實驗室和咨詢服務的主要供應商。Fina Bio公司位于馬里蘭州生物技術走廊的中心，毗鄰美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)、美國食品和藥物管理局(FDA)以及許多生物制藥公司。Fina Bio公司有一個設備齊全的實驗室，用于分子生物學和蛋白質表達、偶聯和偶聯疫苗的鑒定。Fina Bio公司的科學家與約翰霍普金斯大學和馬里蘭大。

FinaBio CRM 作為載體蛋白優(yōu)于 KLH

CRM 優(yōu)于 KLH 作為載體蛋白 197，使用 Fina Biosolutions 的 CRM，EcoCRM 改善免疫應答和療效。197®

鑰孔血藍蛋白 (Keyhole limpet hemocyanin，KLH) 因其*的免疫原性和易于獲得而常被用作載體蛋白。然而，由于其多絲起源和較差的表征，天然 KLH 不是理想的載體。相比之下，遺傳解毒的白喉毒素 CRM 是 58.4 kDa 的重組蛋白，也具有高度免疫原性。通過 MALDI-TOF 質譜可以很容易地表征藥物和肽 CRM 偶聯物。我們的研究表明，用 Fina Biosolutions 的 CRM，EcoCRM 制成的結合物的免疫原性等于或優(yōu)于 KLH 的結合物。®197 197 作為一種極大的外源蛋白，KLH 誘導自身和與其連接的分子產生*的抗體滴度。然而，KLH 是從海蝸牛的血液中獲得的，使得規(guī)模擴大和臨床使用具有挑戰(zhàn)性。它是一種混亂的、有點不明確的聚合蛋白，這使得很難對其進行表征。此外，KLH 在低鹽和中性 pH 溶液中的溶解度較差，KLH 結合物的質量控制存在問題。目前尚無使用 KLH 作為載體蛋白的許可疫苗。相反，CRM 是一種基因解毒的白喉毒素，在細菌中重組產生，為 58.4 kDa 的定義明確的蛋白。CRM 用于多種許可疫苗，包括 Prevnar。Fina Biosolutions 開發(fā)了一種*的大腸桿菌菌株，其以高產率將 CRM 表達為一種可溶性、適當折疊的細胞內蛋白。該蛋白以大腸桿菌 CRM 的商品名“EcoCRM”上市。EcoCRM 可用于研究和臨床。

我們一致發(fā)現 EcoCRM 偶聯物誘導的抗體應答等于或大于 KLH 偶聯物。此外，與 KLH 不同，CRM 結合物可通過 SDS PAGE 和質譜進行表征。®197 我們的研究表明，用 EcoCRM（Fina Bio 的 CRM）制備的結合物的免疫原性與用 KLH 制備的結合物相當。

A. MALDI-TOF 法表征載體蛋白和結合物。與半抗原偶聯前 (A1) 和偶聯后 (A2) 分析 EcoCRM® 載體蛋白。使用在高質量線性模式下操作的 Applied Biosystems/MDS SCIEX 54800 MALDI TOF/TOF 分析儀分析樣品。

B. 抗體半抗原 IgG 反應。在第 0、14 和 28 天，用 1 mg 明礬佐劑配制的 100µg 未結合 KLH（對照）、Hapten-KLH 或 Hapten-EcoCRM s.c. 免疫 BALB/c 小鼠（n≥4 只/組）。ELISA 法測定抗半抗原滴度。

Example 2. Peptide Conjugates

肽 PepL1 與 FinaBio 的即用型結合物 CRM-馬來酰亞胺或 KLH（由肽合成公司）結合。即用型結合物 CRM-馬來酰亞胺極大地促進了 EcoCRM 結合物的合成。如圖所示，與 KLH 結合物相比，CRM 結合物產生了*的抗肽抗體應答。小鼠在接種疫苗后產生免疫反應，并用靶向伯克霍爾德菌表面 OMP 的肽-蛋白 +/-佐劑增強免疫反應。AddaVax 佐劑 (~MF59)。FinaBio 的 Ready-to-conjugate CRM 對結合物的響應顯著高于 KLH。還應注意，即使不存在佐劑，CRM 結合物也具有免疫原性。